以下是ELISA样本制备的关键步骤及注意事项，综合实验规范与常见问题：
一、样本类型处理要点
血清制备
采集后室温静置1小时，4℃ 2500rpm离心10分钟取上清
避免溶血(血红素干扰HRP显色)和细菌污染(内源性酶致假阳性)
血浆处理
使用EDTA抗凝管采集，30分钟内4℃离心分离
肝素抗凝剂可能干扰检测，需参照试剂盒要求选择
细胞培养上清
1500rpm离心10分钟去除细胞碎片，分装后-80℃保存
尿液/脑脊液
10000×g离心2分钟，去除沉淀物后检测
二、保存与冻存规范
样本类型 短期保存 长期保存 禁忌
血清/血浆 2-8℃ 48小时 -80℃(6个月) 反复冻融>3次
细胞上清 4℃ 24小时 -80℃(分装) 室温放置>30分钟
三、关键注意事项
防污染措施
使用无菌离心管，操作全程在冰上进行(除凝血步骤)
细菌污染样本需离心后取上清重新检测
离心参数控制
血清/血浆：2500-3000rpm，10分钟
细胞裂解物：12000-13000rpm，5-10分钟
特殊样本处理
高脂血样本需超速离心(10000×g 15分钟)
组织样本需液氮速冻后研磨，避免蛋白降解
四、常见问题解决方案
假阳性高：检查溶血/脂血情况，更换抗凝剂类型
重复性差：确保分装冻存，避免冻融循环
浓度异常：预实验确定样本稀释倍数(建议1:5-1:10)
通过规范操作可显著提升检测准确性。
注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书。
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