ELISA实验中常见的组织样本处理方法有哪些?

　　在ELISA实验中，组织样本的处理方法直接影响检测结果的准确性。常见的处理方法包括以下几种，具体选择需根据目标蛋白的性质(如可溶性/膜蛋白)和实验需求(如总蛋白/特定组分分析)而定：

　　1. 组织匀浆法

　　适用：大多数可溶性蛋白(如细胞因子、酶、信号分子)。

　　步骤：

　　取材：新鲜或冷冻组织切成小块，预冷PBS冲洗去血液。

　　匀浆：

　　机械匀浆：使用匀浆器(如Polytron)或研磨杵(冰浴操作)。

　　液氮研磨：对坚硬组织(如骨骼、肌腱)更有效。

　　裂解缓冲液：

　　常用RIPA缓冲液(含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)。

　　对脆弱蛋白可用温和裂解液(如Tris-HCl + NP-40)。

　　离心：12,000×g, 4℃, 15-30分钟，取上清(避免脂层和沉淀)。

　　注意：

　　保持低温防止蛋白降解。

　　蛋白浓度需标准化(BCA/Bradford法)。

　　2. 分步离心法(亚细胞组分分离)

　　适用：研究特定细胞器(如线粒体、细胞核)中的蛋白。

　　步骤：

　　组织匀浆后，低速离心(500×g)去除细胞碎片。

　　逐步提高离心力(如10,000×g取线粒体，100,000×g取微粒体)。

　　各组分用裂解液溶解后检测。

　　3. 酶消化法(适用于纤维组织)

　　适用：胶原丰富的组织(如皮肤、肿瘤)。

　　步骤：

　　用胶原酶、胰蛋白酶等消化(37℃, 30-60分钟)。

　　终止消化后离心取上清。

　　4. 酸/有机溶剂提取法

　　适用：小分子肽(如神经递质)、某些磷酸化蛋白。

　　步骤：

　　用TCA或丙酮沉淀蛋白，再中和溶解。

　　5. 特殊处理(膜蛋白/难溶蛋白)

　　去垢剂处理：SDS、Triton X-100溶解膜蛋白。

　　超声破碎：辅助裂解(冰浴间歇超声，避免过热)。

　　关键注意事项

　　抑制剂添加：蛋白酶/磷酸酶抑制剂必加(如PMSF、cocktail)。

　　标准化：

　　按组织重量(mg/mL)或总蛋白浓度(μg/μL)调整样本量。

　　避免过度稀释导致低信号。

　　预实验验证：通过Western Blot或活性检测确认目标蛋白未被降解。

　　示例流程(小鼠肝脏IL-6检测)

　　取100 mg肝组织，液氮研磨成粉末。

　　加入1 mL RIPA裂解液(含抑制剂)，冰上匀浆。

　　4℃离心(12,000×g, 20分钟)，取上清。

　　BCA法测蛋白浓度，用稀释液调整至1 μg/μL。

　　按ELISA试剂盒要求加样检测。

　　根据目标蛋白的定位和稳定性，选择合适方法可显著提高检测灵敏度!

　　注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书‌。

　　天津天正信达供应：RNA开云体育手机版入口试剂盒、开云体育手机版入口试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。