ELISA加样关键细节：避免误差的加样顺序与操作技巧

　　ELISA加样关键细节：避免误差的加样顺序与操作技巧

　　一、加样顺序优化‌

　　标准品与样本的排列‌

　　标准品梯度稀释‌：从高浓度到低浓度依次加样，避免枪头残留污染‌。

　　样本加样顺序‌：建议按样本编号顺序加样，减少操作偏差‌。

　　副孔设置‌：标准品和样本均需做双孔(副孔)，提高数据可靠性‌。

　　空白孔与对照孔‌

　　空白孔(仅加稀释液)用于调零，对照孔(如阳性对照)监控实验有效性‌。

　　二、操作技巧与注意事项‌

　　枪头与移液校准‌

　　使用低吸附枪头，定期校准移液器。

　　换枪头操作：每次加样后更换枪头，避免交叉污染‌。

　　加样手法‌

　　垂直悬空加样‌：枪头勿接触孔壁，减少液体残留‌。

　　避免气泡‌：加样后轻弹板底，消除气泡干扰光路‌。

　　孵育与洗涤‌

　　覆膜需贴紧，减少蒸发导致的边缘效应‌。

　　手工洗涤时，拍板力度适中，避免抗原抗体复合物脱落‌。

　　三、常见误差规避‌

　　温度一致性‌：试剂与样本需平衡至室温(20-25℃)，避免动力学反应差异‌。

　　显色终止时机‌：最高标准品颜色不再加深(或620nm吸光值稳定)时终止反应‌。

　　通过规范加样顺序与操作细节，可显著提升ELISA实验的重复性与准确性‌。

　　注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书‌。

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